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细胞周期检测方法即PI法的操作步骤
1、离心收集细胞，弃上清，用预冷PBS洗细胞两次（加3ml，吹悬，离心，弃上清算洗一次）。加入3ml预冷（-20度）70%乙醇到细胞沉淀中，于4度固定过夜（或者，如果实验周期长可以-20℃长期固定）。
2、分裂指数指细胞群体中分裂细胞所占的百分比，它是测定细胞周期的一个重要指标，也是不同实验研究选择细胞的重要依据。 实验步骤： 消化细胞，将细胞悬液接至内含盖玻片的培养皿中。 CO2培养箱中培养48小时，使细胞长在盖片上。
3、测细胞周期的大致步骤如下： 收集1 x106个细胞，1500rpm离心5 min，弃上清。同样离心条件下，用4℃预冷的PBS洗细胞两次。
4、检测周期最简单、最基本的方法就是利用DNA染料，如PI、7-AAD等（各染料特征见文末附表）对细胞进行染色，DNA含量多则荧光强度高，DNA含量低则荧光强度低，根据荧光强度的变化就可判断细胞处在周期的哪个阶段。
5、培养一段时间后（一般小于一个细胞周期），固定细胞。根据所使用模拟核苷酸的不同，使用不同的方法。EdU，改变缓冲液的pH值，就会发出荧光。而BrdU则需用荧光抗体识别，需要对细胞膜和核膜进行通透处理。再加入PI对DNA染色。
如何用modfit分析细胞凋亡
1、ModFit 是由美国Verity Software House公司设计，专门用于流式细胞术中进行细胞周期分析的软件。
2、细胞培养：取对数生长期的细胞，按1×106cells/ mL以1mL接种24孔板或2mL接种于6孔板内，进行所需的处理（比如加入药物），特定时间后终止培养，进行下一步的实验。
3、这个说明结果是使用ModFit这个软件分析的。非常古老的一个软件了，现在已经没什么使用了。An1 G1是用来设置门的命令语句。也就是让程序自动识别第一个峰为G1期。
4、图5-12 使用QuantiCALC软件计算每个细胞的抗体结合位点数 我们使用ModFit LTTM软件进行DNA定量分析。因为DNA峰(G0/G1期，S期和G2M期)不是离散的，所以我们对曲线以下的面积进行积分，以得到每个细胞亚群的百分含量结果。
5、以3mL的PBS洗涤一次，加入400uL的CCAA溶液（PI染液，engreen），100ulRNaseA（100ug/mL），4摄氏度避光孵育30min。流式分析：以标准程序用流式细胞仪检测，一般计数2~3万个细胞，结果用细胞周期拟和软件ModFit分析。
流式细胞仪检测的原理
流式细胞检测原理如下：流式细胞仪是对细胞进行自动分析和分选的装置。
流式细胞术工作原理是在细胞分子水平上通过单克隆抗体对单个细胞或其他生物粒子进行多参数、快速的定量分析。
流式细胞术的基本原理是通过细胞特异性荧光染色或其他标记技术，将细胞分为不同的群体，并利用流式细胞仪进行多参数分析和排序。
首先，机器吸取细胞混悬液，射入由鞘液（一般都是磷酸盐缓冲液）。由于鞘液的流速大，所以细胞混悬液通过轴流的形式在中央，一般是单个细胞排队的形式。 然后细胞通过检测窗口。有激光束照射。
在流式细胞术测量中，常用的是两种散射方向的散射光测量：①前向角(即0角)散射(FSC)；②侧向散射(SSC)，又称90角散射。这时所说的角度指的是激光束照射方向与收集散射光信号的光电倍增管轴向方向之间大致所成的角度。
怎样用modfit分析细胞周期
1、在细胞周期中，使用modift进行画门，因为用的是PI染色（碧云天），所以横坐标选择PE-A 因为H和A成正比，所以圈门的时候就圈同一斜率上的细胞，Gate1和Gate2一样。
2、检测周期最简单、最基本的方法就是利用DNA染料，如PI、7-AAD等（各染料特征见文末附表）对细胞进行染色，DNA含量多则荧光强度高，DNA含量低则荧光强度低，根据荧光强度的变化就可判断细胞处在周期的哪个阶段。
3、ModFit 是由美国Verity Software House公司设计，专门用于流式细胞术中进行细胞周期分析的软件。
4、这个说明结果是使用ModFit这个软件分析的。非常古老的一个软件了，现在已经没什么使用了。An1 G1是用来设置门的命令语句。也就是让程序自动识别第一个峰为G1期。
5、可以使用流式细胞术来分析细胞周期的分布情况。该技术通过染色剂标记细胞DNA，并使用流式细胞仪测量细胞DNA含量。根据细胞DNA含量的变化，可以确定细胞处于G1期、S期、G2期还是M期。
